dna的粗提取與鑒定

實驗十一 DNA的粗提取與鑒定

教學目的

1、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法

2、觀察提取出來的DNA物質

實驗原理

1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當NaCl的物質的量濃度為0.14mOl/L時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2、DNA不溶于酒精溶液，但是細胞中的某些物質則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質較少的DNA。

3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

注意事項

1、步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要沿燒杯內壁緩緩加入，不能一次快速倒入。

2、實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。

實驗用具

雞血細胞液(5～10mL);體積分數為95%的冷酒精，蒸餾水，質量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質的量濃度分別為2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺試劑;燒杯(100mL，1個， 50mL， 500mL，各2個)，漏斗，試管(20mL，2個)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1個)，紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺，鐵環，三角架，酒精燈，石棉網，載玻片，試管夾。

課時安排

一課時

課前準備

制備雞血細胞液，方法是：將質量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液100mL，置于500mL燒懷中，注入新鮮的雞血(約180mL)，用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內一天，使血細胞自行沉淀。也可以用離心機離心2 min(轉速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。

板書

實驗十一 DNA的粗提取與鑒定

實驗原理

1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2、用冷酒精提取出含雜質較少的DNA。

3、DNA在沸水浴時被二苯胺染成藍色。

方法步驟：

1、提取雞血細胞的`細胞核物質：順時針方向攪拌，稍快，稍重。 5 min

2、溶解細胞核內的DNA

3、析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時針方向攪拌，緩慢

4、過濾：取黏稠物

5、再溶解：順時針方向攪拌，較慢。3 min

6、過濾：取濾液。

7、提取出含雜質較少的DNA，逆時針方向攪拌，稍慢。5 min

8、DNA的鑒定：沸水浴5min((1)無變化(2)藍色)

上節課我們通過幾個驗證性實驗，證明了DNA是主要的遺傳物質。那么DNA是什么樣的物質呢?今天我們就通過實驗將它提取出來，進行觀察和鑒定。

通過預習，我們知道選用雞血細胞液作為實驗材料。在制備雞血細胞液時，所用的檸檬酸鈉有防止血液凝固的作用。

制備過程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細胞液。

大家在動手做實驗之前先要明確幾個需要注意的問題。

1、要嚴格按照實驗指導的方法步驟去操作。

2、實驗中有多個步驟都要用玻璃棒進行攪拌，使用時玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導去操作。

3、在DNA的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位，也不要近距離觀察。

下面在實驗進行過程中，要思考每一操作步驟要達到什么目的。

在進行步驟1時，利用攪拌的5分鐘，做如下提問：

為什么要加蒸餾水?加入蒸餾水后細胞將會怎樣?

(讓細胞內溶液的濃度大于周圍溶液的濃度，細胞會吸水以至脹破)

為什么要用力攪拌?

(可以加速血細胞和細胞核的破裂)

所以下一步驟過濾將濾去的是細胞膜和核膜等物質。

在進行步驟3時，要向全班明確：這一步驟是這個實驗成敗的關鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬不能太快太猛，防止打碎DNA。

觀察濾取出來的黏稠物的顏色。

有的同學提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA時不充分，也可能是析出黏稠物時攪拌的快了。

將黏稠物再溶解時一定要充分，多攪拌。以免有DNA損失。

加入冷酒精時動作要慢。

當玻璃棒上出現絲狀物纏繞時，繼續慢慢攪拌。至不再增加時，取出吸干上面的水分。仔細觀察絲狀物呈什么顏色?(黃色)

這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時要注意不要接觸到藥液。進行沸水浴時，在實驗室較為通風的地方集體進行。

利用沸水浴的5 min。

步驟3中加入蒸餾水的目的?與步驟1有什么區別?

(步驟3中加蒸餾水是使NaCl溶液的濃度逐漸降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細胞吸水脹破)

步驟7為什么要加50mL的冷酒精?

(因為DNA不溶于冷酒精，而其他物質可以溶解在酒精中，使含雜質較少的DNA絲狀物可以析出。懸浮于溶液中)

現在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個試管中溶液的顏色有什么不同?

(有絲狀物的試管變成藍色，另一試管還是原來顏色)

這一鑒定結果說明什么問題?

(提取出的絲狀物是DNA)

那么你看到的絲狀物的粗細是不是DNA分子的直徑呢?

(不是。DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個DNA分子聚在一起形成的)

下面請同學們將實驗用具，按原樣擺放整齊，實驗桌要保持清潔。

今天我們通過實驗將DNA提取出來進行了觀察和鑒定，那么DNA的化學組成，分子結構和復制是怎樣的?我們下節課再繼續研究。

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