小伙伴們好,最近小評發現大家對于檢測蛋白質的方法有哪些,檢測蛋白質的方法介紹這個問題都頗為感興趣的,今天整理了一些相關信息一起往下看看吧。
1、凱氏定氮法
2、凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮含量的方法。即在催化劑的存在下,樣品中的有機氮用濃硫酸消化轉化為無機銨鹽,然后銨鹽在堿性條件下轉化為氨,用水蒸氣蒸餾出來,用過量的硼酸溶液吸收,再用標準鹽酸滴定,計算出樣品中的氮含量。
3、因為蛋白質中的氮含量是相對恒定的,所以可以從其氮含量計算出蛋白質的含量,所以這種方法是一種經典的蛋白質定量方法。
4、縮二脲法
5、縮二脲法是一種用于鑒定蛋白質的分析方法。縮二脲試劑是一種堿性含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制而成。
6、當底物含有肽鍵(多肽)時,試液中的銅與多肽配位,絡合物呈紫色。濃度可通過比色法分析,紫外-可見光譜中的波長為540nm。識別反應的靈敏度為5-160毫克/毫升。反應蛋白單位為1-10毫克。
7、苯酚試劑法
8、取6支試管,分別貼上標簽。前五個試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液。最后一個試管加入待測蛋白溶液,沒有標準蛋白溶液。在室溫下放置30分鐘。以第一個不含蛋白溶液的試管為空白對照,在650nm波長處測量每個試管中溶液的吸光度。
9、紫外線吸收法
10、大多數蛋白質在280nm波長處具有特征性的最大吸收,這是由于蛋白質中存在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。可用于測定0.1 ~ 0.5 mg/ml蛋白質溶液的含量。
11、取9支試管,分別貼上標簽。前8個試管分別加入不同濃度的標準蛋白溶液,第一個試管不加入標準蛋白溶液,最后一個試管加入待測蛋白溶液,不加入標準蛋白溶液。每個試管中的液體總量是通過加入蒸餾水來彌補而保持一致的。將液體混合均勻,在280nm波長下進行比色分析,記錄吸光度值。
12、科斯亮藍法
13、考馬斯亮藍顯色法的基本原理是蛋白質能與考馬斯亮藍G-250定量結合。考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合后,其可見光最大吸收峰從465nm變為595nm。
14、當考馬斯亮藍G-250的濃度過量且恒定時,當溶液中蛋白質的濃度不同時,不同量的考馬斯亮藍G-250會從465nm的吸收峰形式變為595nm的吸收峰形式,這種變化有一定的定量關系。
15、一般來說,當溶液中蛋白質的濃度增加時,顯色溶液在595nm處的吸光度基本上可以線性增加。因此,考馬斯亮藍G-250顯色法可用于測定溶液中蛋白質的含量。
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